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关于pcr假阳性的原因及解决方法

2024/2/8 23:24:58发布16次查看
假阳性的原因及解决方法要知道高电位治疗仪市场一定会给整个行业带来极大的影响力。
出现的pcr扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高
引物设计不合适选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行pcr扩增时,扩增出的pcr产物为非目的性的序列
靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性
需重新设计引物
靶序列或扩增产物的交叉污染
这种污染有两种原因
一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假阳性
这种假阳性可用以下方法解决操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外
除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒
所用离心管及样进枪头等均应一次性使用
必要时,在加标本前,反应管和试剂用紫外线照射,以破坏存在的核酸
二是空气中的小片段核酸污染,这些小片段比靶序列短,但有一定的同源性
可互相拼接,与引物互补后,可扩增出pcr产物,而导致假阳性的产生,可用巢式pcr方法来减轻或消除
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技术原理
产物的电泳检测时间
出现假阴性,不出现扩增条带
假阳性的原因及解决方法
出现非特异性扩增带
扩增出现片状拖带或涂抹带
克隆pcr产物的最优条件是什么?
克隆pcr产物是否需要用凝胶纯化?
克隆pcr产物如果没有回收到目的片段,还需要作什么对照实验?
克隆pcr产物对照实验结果好,却没有回收到目的片段,实验出了什么问题?
pcr反应体系与反应条件
什么是引物?
引物的设计原则,设计引物应遵循的下原则
pcr反应条件温度、时间和循环次数的选择
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